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                多╳肽的保存和溶解

                时间:2022-05-01浏览次数:485

                多■肽的保存

                多肽一般是以冻干粉的形式保存,其在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥后并保存于-20℃干燥器中,大多数肽在此温度下可以存放几年不变。如果一次使用的肽量不多,最好分装成几个小包装,取用更为方便。

                为减少湿度的★影响,在将冻干肽暴露于空气之前,应先将其在干燥的条件下恢复至室温。当无法冷冻▽干燥时,最好的方法是以较小的样量存放,并尽快使用。   

                对于含Met,CysTrp的多肽,脱氧缓冲剂对其保护必不可少,因为这种∑多肽易被空气氧化,比较好的解决方法是可以在封瓶前,慢慢通入氮气或氩气流从而降低氧化作用,没有条件的建议△-80度干燥冻存。

                GlnAsn的多肽也容易降解,所以相对于其他不含此类氨基酸的多肽,其保存期较短。

                 

                二、多肽的溶解●

                溶解肽是一个很重要的环节。如果溶解不当可能导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取@决于肽的序列,所以,,设计多肽时要加注意,肽序列中建议应包含20%的带电残基以增加其溶解度。   

                在使用之前,客户可以遵循以下☆三个基本原则来选择合适的溶剂溶解多肽。

                首先,所选溶剂一定能充分溶解多肽;其次,所选溶◥剂能与实验条件兼容;最后,所选溶剂不能与肽反应,也不能使肽降解。

                只要肽的量允许,可以↘先用少部分肽溶解,然后再将全部样品溶解。如果需要从溶剂中回收肽,可以选择 一种初始溶剂使其在冻干后容易去除。   

                以下建议或许对您溶解肽有》所帮助:   

                1. 少于5个氨基酸的肽一般溶于水溶液,强疏水的氨基酸(W,I,L,F,M,V,Y)除外。   

                2. 如果带电氨基▃酸平均分布于全部序列中,那么含有>25%带电氨基酸(E,D,K,R,H)的亲水肽和含有<25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的纯化ξ系统一般为0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN。因此,如果肽溶解在没有缓冲能力或者缓冲能力很弱的缓冲液中,结果可能导致肽溶液呈酸性。在使用别的方法溶解肽时务必使溶剂的pH值ζ 近乎中性。酸性肽(E+D残基数多于K+R+H残基 数)和碱性肽(K+R+H残基数多于E+D残基数)在中性pH值『条件下比在酸性pH值下更易于溶解。  

                3. 对于疏水氨基酸含量╲╲为50%~75%的肽,即使序列中〓含有>25%带电氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解。最好先把肽溶于最少量的︽强有机溶剂如DMF、ACN、异丙醇、乙醇、乙酸、4-8M GdnHCl、 尿素,或者DMSO(序列中没有C,W,M时),及其它类似的有机溶剂中。最好将溶解肽的「有机溶 剂缓慢地逐滴加入水溶液中,如果溶液变浑浊,可能是←达到了溶解极限,继续溶解▅就没什么用了。 需要注意的是,最开始选择的溶剂应该与实验系统兼容。   

                4. 疏水氨基酸含量>75%的强疏水肽一般也不溶于水溶液。此类肽也应该先用强有机溶剂(如TFA,甲酸)溶解,如果将其加入到水溶液中也可〒能产生沉淀。最后的肽溶液可能需要高浓度的有机溶剂使之变性→→,而有机溶剂一般不用于∑活细胞的生物功能研究。   

                5. S,T,E,D,K,R,H,N,Q,Y含量高(>75%)的多肽序列容易形成卐多余的分子间氢键网络, 在浓的水溶液中容易形成凝胶。此类肽可以用步骤3所述※方法溶解。为了减少溶解中可能出现的问题,建议客户从设计上和︾序列上多加考虑,以改善肽的溶解度。


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