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                生物素标记多肽

                时间:2022-05-05浏览次数:462

                在许多蛋白研究领域中,生物素标记肽通常与亲和素结合而被检测或纯化:: 免疫印迹(WB)、ELISA、免疫沉淀 (IP),多肽亲和纯化、免疫组化 (IHC)、细胞表面标记、流式细胞术/荧光激活细胞分类(FACS)

                森尔生物提供生物素标记肽合成服务。通常,生物素可被标记在N端或C(经由Lys)。我们推荐N端标记,其标记的成功率更高,所需时︼间更短,操作更简洁。

                生物素可通过各种不同的linkerspacers与多肽∩隔离。一般建议引入间隔器如Ahx(一个6碳链接器)让生物素更稳定或更灵活。

                我们提供N端或C端生物素标记:Biotin (N terminus), Lys(Biotin)

                带有linker(Ahx)的生★物素化: Biotin-Ahx (N terminus), Lys(Ahx-Biotin)(middle), Lys(Ahx-Biotin)(C terminus)

                 

                 

                Biotin.png


                 

                生物素标记肽的Pull-down实验方案分析

                生物素标记肽可与亲和素磁珠共轭以生成树脂,用于肽pulldown试验。先把生物素标记肽上样至Immobilized streptavidin beads (Pierce) 锚定有亲和素的♀磁珠上,再与细胞裂解液孵育。细胞裂解于1%(v/vNonidet P-40, 150 mM sodium chloride, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, protease inhibitors (Complete Tablets, Roche Applied Science), 加入 1 mM sodium orthovanadate作为磷酸酶抑制剂。等量的蛋白质分别与被锚定的多肽在4℃孵育6小时。经过大量洗涤,在SDS样品buffer中煮沸,结合蛋白可【从被锚定的多肽洗脱下来,或者,用50 mM dithiothreitol将多肽与蛋白复合物从磁珠中断开。将来自活¤性肽和对照目标肽pull-downs的洗脱液合并,以作进一步的分◣析。



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